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糖化血紅蛋白的不同檢測方法及公認(rèn)的金標(biāo)準(zhǔn)方法

 昵稱2563867 2010-08-05

目前,糖化血紅蛋白HbA1c作為糖尿病篩選、診斷、血糖控制、療效考核的有效檢測指標(biāo),在臨床中得到了廣泛的使用,其理由有二個:

目前HPLC法測定HbA1c使其準(zhǔn)確性和重復(fù)性得到很大的提高。美國臨床化學(xué)協(xié)(AACC)糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化分會和IFCC HbA1C標(biāo)準(zhǔn)化工作組建議,以DCCT研究中所“指定的方法”- HPLC方法作為檢測糖化血紅蛋白的金標(biāo)準(zhǔn),希望以此使大多數(shù)的實驗方法能夠參照“指定的方法”實現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化。
1993年美國 1型糖尿病控制及并發(fā)癥實驗(DCCT)和英國大規(guī)模的2型糖尿病控制與并發(fā)癥關(guān)系研究(UKPDS)的研究中把HbA1c作為糖尿病控制的一個觀察指標(biāo)。1996年4月起在日本,HbA1c被納入老年人保健法中糖尿病篩選的檢查項目。2002年美國糖尿病協(xié)會(ADA)已將其作為監(jiān)測糖尿病控制的金標(biāo)準(zhǔn),對其應(yīng)用也作了明確的規(guī)定:即所有糖尿病患者均應(yīng)常規(guī)測定HbA1c。其初診時測定結(jié)果為基線時的代謝狀況,此后的測定值則作為糖尿病長期治療控制中的一部分,這樣在提高糖尿病診斷水平、血糖控制、慢性并發(fā)癥的防治中具有十分重要的應(yīng)用價值。
目前通常認(rèn)為檢測HbA1c的臨床意義有三點:
在糖尿病的篩選普查中有早期提示的價值,可作為輕癥、2型、“隱性”糖尿病的早期
診斷指標(biāo)。

2.在糖尿病的治療中, HbA1C是評價血糖控制好壞的重要標(biāo)準(zhǔn)。

3.預(yù)示微、小血管并發(fā)癥,估價糖尿病慢性并發(fā)癥的發(fā)生與發(fā)展情況。

糖化血紅蛋白的幾種不同檢測方法
測定GHb主要是利用GHb和Hb的物理化學(xué)性質(zhì)的不同而進(jìn)行的,目前主要的檢測方法有5種:

離子交換高效液相色譜分析法- 檢測糖化血紅蛋白HbA1c的金標(biāo)準(zhǔn)
基于Hbb鏈N末端纈氨酸糖化后所帶電荷不同而建立。在中性pH條件下,HbA1c攜帶的正電荷相對較少,因此可通過HPLC法將其與其它組分(HbA1c,HbA1b, HbA1a,HbF,HbA0)區(qū)分開,得到分離。此方法曾應(yīng)用于美國DCCT的研究,是目前檢測HbA1c的金標(biāo)準(zhǔn)。

(2)微柱法

微柱內(nèi)的陽離子交換樹脂(如Biorex 70)在PH近7時解離后帶陰電荷,而Hb解離后帶陽電荷,二者可形成離子鍵。由于GHb的陽電荷比HbA少,與樹脂的結(jié)合力相對低,容易被洗脫。用分光光度計分別測定洗脫液中GHb和溶血物中總Hb的吸光率(A),可計算出GHb占總Hb的百分比(%)。但此方法的影響影響因素比較多:

1. 洗脫溫度對結(jié)果有較大影響   

2. 抗凝劑肝素能使測定結(jié)果增高

3. 某些血紅蛋白如HbF異常增加時,也會與糖化血紅蛋白同時洗脫,從而使結(jié)果產(chǎn)生偏差

(3) 電泳法

膠體顆粒在一定條件下可以帶有電荷,帶有電荷的膠體顆??梢越桁o電吸引力在電場中泳行,帶正電荷者泳向負(fù)極,帶負(fù)電荷者泳向正極,此種現(xiàn)象稱為電泳。血清中各種蛋白質(zhì)都有它特有的等電點,各種蛋白質(zhì)在各自的等電點時呈中性狀態(tài),它的分子所帶正電荷與所帶負(fù)電荷量相等。但此方法學(xué)的弱點是:

1. 需成批進(jìn)行樣本分析,速度比較慢,無法進(jìn)行實時檢測

2. 自動化程度低,急診插入、自動維護(hù)等功能比較欠缺。

(4)親和層析法

利用生物高分子能與相應(yīng)的專一配基分子可逆結(jié)合的原理將配基通過共價鍵牢固地結(jié)合于固相載體上制得親和吸附系統(tǒng)。帶有雜質(zhì)的高分子分離目的物在一定條件下,能以某種次級鍵與已固相化的配基結(jié)合,而雜質(zhì)則不吸附,除去雜質(zhì)后變換條件,又可以使待分離的高分子物質(zhì)重新解離,獲得純化。

除葡萄糖外,血液中所有的糖類都可與Hb相結(jié)合,因此該方法的檢測結(jié)果為糖化血紅蛋白總量,而不是HbA1c的含量。

(5) 免疫法

使用單克隆或多克隆抗體直接測定血紅蛋白β-鏈上糖基化的N末端的4-8個氨基酸,因此對HbA1C上的糖基特異性好。

但是許多同源的糖化血紅蛋白變體也有相同的N末端結(jié)構(gòu),從而會對結(jié)果造成干擾。在定標(biāo)方面,需與HPLC作相關(guān)校正。

綜合現(xiàn)在臨床實驗室中常用的GHb測定方法,因為原理的不同,測定的結(jié)果準(zhǔn)確度、重復(fù)性都有所差異。相信隨著對HbA1c實驗方法標(biāo)準(zhǔn)化的重視和提高,HbA1c項目的檢測在臨床會得到越來越多的應(yīng)用。

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