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有機陰離子轉(zhuǎn)運多肽(OATP)1B1是重要的肝攝取轉(zhuǎn)運蛋白,介導很多內(nèi)源性物質(zhì)和外源性藥物轉(zhuǎn)運到肝細胞。為了鑒別和研究天然產(chǎn)物中潛在的OATP1B1的調(diào)節(jié)劑,本實驗采用穩(wěn)定表達OATP1B1的中國倉鼠卵巢細胞(CHO),在96孔板中測定了21種常見天然化合物和提取物對OATP1B1介導熒光素甲氨蝶呤轉(zhuǎn)運的影響。該方法可進一步應用于高通量篩選大化合物庫。結(jié)果表明:若干黃酮類化合物(如槲皮素、槲皮苷、蘆丁、菊花梗葉總黃酮和桑皮黃素等)和三萜類化合物(如甘草次酸和甘草酸等)在體外實驗中顯著抑制了OATP1B1的轉(zhuǎn)運功能,其IC50值均小于16μM;黃酮類化合物比其對應的糖苷類化合物的抑制作用更強,而且糖的類型和糖鏈長度對其抑制作用均有影響。為了考察這些化合物對OATP1B1介導其他底物攝取的影響,我們建立了檢測OATP1B1藥物底物氟伐他汀和羅伐他汀的LC-MS/MS方法。研究結(jié)果表明,天然產(chǎn)物對OATP1B1轉(zhuǎn)運功能的影響具有底物依賴性。本論文的研究結(jié)果將有助于預測和避免潛在的OATP1B1介導的不良藥物-藥物和藥物-食物相互作用,為臨床合理用藥提供實驗依據(jù)和指導。有機陰離子轉(zhuǎn)運多肽2B1(OATP2B1)表達在胎盤、肝臟、乳腺、腦和腸等組織中,介導四溴酚酞磺酸鈉、3-硫酸雌酮和3-硫酸脫氫表雄酮等的轉(zhuǎn)運。糖基化是一種重要的蛋白翻譯后修飾,OATPs的共有結(jié)構(gòu)特征—潛在的N-糖基化位點位于胞外環(huán)2和5上。為探究OATP2B1上N-糖基化對其表達及功能的影響,我們首先使用生物信息學軟件預測4個潛在N-糖基化位點,并該對應位點處的將天冬酰胺突變成谷氨酰胺,得到四個單突變(N146Q、N176Q、N350Q和N538Q)和一個雙突變(N176/538Q)。然后對于這些OATP2B1突變體的功能和表達的評估實驗在HEK293細胞中進行。結(jié)果表明:OATP2B1上的天冬酰胺176和538是糖基化位點。當這兩個位點被分別突變時,均使得蛋白水平降低以及轉(zhuǎn)運活性顯著降低;當兩個位點被同時突變時,蛋白水平顯著下調(diào),同時轉(zhuǎn)運功能基本喪失。這表明N-糖基化對OATP2B1的功能和表達非常重要?！? 
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