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染色質(zhì)免疫共沉淀該怎么做?這道題我來說下解題思路

 醫(yī)學(xué)院的石頭 2018-06-12




簡(jiǎn)介


染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(Chromatin Immunoprecipitation, ChIP)是一種適用于研究蛋白質(zhì)與生物體細(xì)胞中 DNA 相互作用的經(jīng)典方法,這項(xiàng)技術(shù)幫助研究者判斷在細(xì)胞核中基因組的某一特定位置會(huì)出現(xiàn)何種組蛋白修飾 。


將 ChIP 與第二代測(cè)序技術(shù)相結(jié)合的 ChIP-Seq 技術(shù),能夠高效地在全基因組范圍內(nèi)檢測(cè)與組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等互作的 DNA 區(qū)段,研究體內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子和靶基因啟動(dòng)子區(qū)域直接相互作用的方法,對(duì)于調(diào)控蛋白在基因組上的結(jié)合靶點(diǎn)篩選、差異化表觀遺傳變異的原理揭示提供了重要的解決思路。



技術(shù)原理


在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)-DNA 復(fù)合物,并將其隨機(jī)切斷為一定長(zhǎng)度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段,然后通過免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體,特異性地富集目的蛋白結(jié)合的 DNA 片段,通過對(duì)目的片斷的純化與檢測(cè),從而獲得蛋白質(zhì)與 DNA 相互作用的信息。



適用研究


1. 篩選調(diào)控蛋白在基因組上的結(jié)合靶點(diǎn):針對(duì)轉(zhuǎn)錄因子、DNA/RNA 聚合酶、轉(zhuǎn)錄復(fù)合物等調(diào)控因子蛋白進(jìn)行特異性的富集,分離純化與之結(jié)合的靶 DNA 片段并測(cè)序,分析篩選到準(zhǔn)確有效的靶位點(diǎn)、靶基因數(shù)據(jù);


2. 揭示差異化表觀遺傳變異的原理:通過對(duì)不同表型組織內(nèi)組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子蛋白及其他結(jié)合蛋白進(jìn)行染色質(zhì)免疫共沉淀測(cè)序并定量分析靶基因表達(dá)調(diào)控水平或針對(duì)同種組蛋白進(jìn)行甲基化、磷酸化、泛素化修飾所導(dǎo)致的結(jié)合位點(diǎn)變異進(jìn)行分析,即可準(zhǔn)確揭示差異化表觀變異原理;


3. 研究表觀遺傳變異疾病:借助染色質(zhì)免疫共沉淀測(cè)序技術(shù)結(jié)合生物信息分析揭示由蛋白與 DNA 相互作用變異而引起的疾病的原理,明確表觀遺傳修飾在癌癥等表觀遺傳變異疾病的發(fā)生發(fā)展過程中的具體作用機(jī)制。



實(shí)驗(yàn)步驟



但是 


光了解流程還不夠,還要摸索試劑的濃度,摸索實(shí)驗(yàn)過程細(xì)節(jié)。但是好不容易得到的樣本經(jīng)不起浪費(fèi),寶貴的時(shí)間還要用來思考更重要的實(shí)驗(yàn)方案,來吧,外包吧!


■ 服務(wù)及產(chǎn)品推薦 


染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)

價(jià)格:8 000~13 000

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技術(shù)優(yōu)勢(shì)


1. 完善的實(shí)驗(yàn)平臺(tái):全進(jìn)口的儀器試劑,高標(biāo)準(zhǔn)甲醇交聯(lián)、Bioruptor 超聲打斷;

2. 專業(yè)的實(shí)驗(yàn)流程:特有的 ChIP 優(yōu)化流程,個(gè)性化實(shí)驗(yàn)方案,IP 效率高,高成功率(高于 95%);

3. 豐富的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn):專業(yè)的 ChIP 服務(wù)部門,實(shí)驗(yàn)人員從事 ChIP 實(shí)驗(yàn)長(zhǎng)達(dá) 5 年以上,上千次成功 ChIP 實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn),針對(duì)不同動(dòng)植物組織有不同的前處理方式。


交付結(jié)果


染色質(zhì)片段化結(jié)果、富集產(chǎn)物濃度、Input 率或 Fold Enrichment、測(cè)序 Fasta.q 文件、分析報(bào)告


經(jīng)典案例


(向上滑動(dòng)查看更多)


在 Developmental Cell 上發(fā)表的 《Convergent Transcriptional Programs Regulate cAMP Levels in C. elegans GABAergic Motor Neurons》 通過 ChIP-seq 研究了秀麗線蟲的兩個(gè)高度保守轉(zhuǎn)錄因子 UNC-30 和 UNC-55 調(diào)控的靶基因,這是首次在多細(xì)胞動(dòng)物中原位表達(dá)水平轉(zhuǎn)錄因子的 ChIP-seq 實(shí)驗(yàn)。


研究揭示 UNC-30 和 UNC-55 這兩個(gè)轉(zhuǎn)錄因子各自均調(diào)控近 2 000 多個(gè)基因的表達(dá),而且非常有意思的是,它們共同調(diào)控 1 300 多個(gè)編碼和非編碼基因的表達(dá)。這些靶基因在多個(gè)神經(jīng)元發(fā)育和可塑性具有重要調(diào)控作用的信號(hào)通路中行使功能。

 


ChIP-qPCR 檢測(cè)

促銷價(jià):180 原價(jià):300


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活動(dòng)說明


1. 此費(fèi)用僅針對(duì) ChIP 純化富集后 DNA- 片段的檢測(cè),其它檢測(cè)費(fèi)用另計(jì)且不做促銷。


2. ChIP 和 QPCR 檢測(cè)均委托我司才可享受此促銷價(jià),單項(xiàng)的 QPCR 檢測(cè)不參加此活動(dòng)。


技術(shù)優(yōu)勢(shì)


1. 全基因覆蓋: ChIP-Seq可在全基因組范圍對(duì)蛋白結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行篩選與鑒定


2. 高靈敏度:每個(gè)樣本可獲得數(shù)百萬(wàn)條的序列標(biāo)簽,可發(fā)現(xiàn)研究基因組上稀有的蛋白結(jié)合位點(diǎn)


3. 高精確率:可獲得高水平的信噪比數(shù)據(jù),準(zhǔn)確區(qū)分真實(shí)事件與噪音,精確定位蛋白結(jié)合位點(diǎn)


4. 高性價(jià)比:僅需較少的數(shù)據(jù)量即可鑒定全基因組范圍內(nèi)的結(jié)合位點(diǎn)


交付結(jié)果


標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)報(bào)告、詳細(xì)步驟、 測(cè)序結(jié)果、QPCR 驗(yàn)證結(jié)果、數(shù)據(jù)分析參考


化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)

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現(xiàn)在,你不用出一分錢便可感受這套便捷與高效的系統(tǒng)。


一款無需暗室曝光,可直接進(jìn)行 ECL 成像的發(fā)光成像系統(tǒng),獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果,也適用于核酸檢測(cè)。此系統(tǒng)靈敏度可媲美膠片,成像速度更快,且線性范圍更寬。


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