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PCR上崗證培訓(xùn)—歷年考試知識點

 Cheximing 2020-07-25

文章來源：檢驗醫(yī)學(xué)

在我國新冠病毒疫情防控進入常態(tài)化的今天，核酸檢測也越來越普及越來越重要。6月8日，國家衛(wèi)健委發(fā)布了《關(guān)于加快推進新冠病毒核酸檢測的實施意見》，文件提出：二級以上醫(yī)院應(yīng)具備開展新冠病毒核酸檢測能力。

這就意味著全國大量醫(yī)療機構(gòu)需建設(shè)PCR實驗室。那么建設(shè)PCR實驗室過程中最主要一點就是人員資質(zhì)培訓(xùn)，實驗室成員必須經(jīng)過相關(guān)培訓(xùn)并通過考核。現(xiàn)將歷年理論考試知識點總結(jié)如下，供大家參考。
Q

PCR實驗室建設(shè)、認(rèn)證審核依據(jù)：
A

《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號）、《醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗實驗室工作導(dǎo)則》

Q

臨床基因擴增檢驗實驗室技術(shù)審核流程包括：
A

申報、資料審核、現(xiàn)場驗收、整改、通知審核結(jié)果。

Q

臨床基因擴增實驗中質(zhì)量保證：
A

室內(nèi)質(zhì)控（重復(fù)性）和室間質(zhì)評（準(zhǔn)確度）。

Q

PCR技術(shù)的發(fā)明人是：
A

Kary Mullis。

Q

核酸包括兩種類型：
A

脫氧核糖核酸（ATCG）和核糖核酸（AUCG）。

Q

根據(jù)遺傳中心法則，遺傳信息的流動方向為
A

DNA?RNA?蛋白質(zhì)。

Q

臨床基因擴增檢驗實驗室一般包括四個分區(qū)：
A

試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。

Q

核酸樣品含量可根據(jù)（   ）處波長的吸光度算出。
A

260nm

Q

核酸樣品純度可根據(jù)（   ）處波長的吸光度比值算出。
A

260/280nm

Q

cfDNA是指
A

細(xì)胞游離DNA，ctDNA是指循環(huán)腫瘤DNA。

Q:
PCR檢測用的試劑應(yīng)當(dāng)
A:

經(jīng)國家藥監(jiān)局批準(zhǔn)。

Q:
醫(yī)療廢物垃圾袋結(jié)扎采用
A:

“鵝口頸”套扎結(jié)扎。

Q:
銳器盒容積達(dá)到總體積的（   ）時需要更換。
A:

3/4

Q:
PCR中，全血樣本采集一般
A:

使用EDTA或枸櫞酸鹽抗凝，不使用肝素抗凝。

Q:
Taqman探針兩端標(biāo)記有
A:

熒光基團和淬滅基團。

Q:
新冠病毒核酸檢測應(yīng)該
A:

在Ⅱ級生物安全實驗室開展，同時采用生物安全Ⅲ級實驗室的個人防護。

Q:
PCR基本反應(yīng)過程包括
A:

變性、退火、延伸。

Q:
核酸的基本結(jié)構(gòu)單位是：
A:

核苷酸，其組成包括堿基、核糖或脫氧核糖和磷酸。

Q:
DNA雙鏈中
A:

堿基A-T之間以兩個氫鍵相連，G-C以三個氫鍵相連。

Q:
PCR試劑盒中
A:

加入尿苷糖基酶（UNG）具有防“污染”作用。

DNA變性是指在物理或化學(xué)因素的作用下，導(dǎo)致兩條DNA鏈之間的氫鍵斷裂，而核酸分子中其他共價鍵不受影響。

自制室內(nèi)質(zhì)控品時，應(yīng)對質(zhì)控品的均勻性和穩(wěn)定性進行評價。

PCR的測定點在PCR的指數(shù)擴增期，非平臺期。

臨床檢驗中的隨機誤差通常表現(xiàn)為質(zhì)控物測定結(jié)果的SD增大。

核酸溶于水，不溶于乙醇等有機溶劑。

核酸的解鏈溫度（Tm）與G+C含量有關(guān)，G+C含量愈大，Tm愈高。

以次氯酸為主要成分的清潔劑在配制后24小時內(nèi)使用。

質(zhì)量管理體系要素包括質(zhì)量方針、質(zhì)量目標(biāo)和質(zhì)量指標(biāo)。

核酸的復(fù)制是由5’-3’方向進行。

DNA變性的本質(zhì)是雙鏈間氫鍵的斷裂。

Q:
核酸提取純化中，RNase潛在污染源是：
A:

實驗室環(huán)境、實驗用品如吸頭、離心管等、實驗人員的手。

Q:
生物安全水平的級別共分為
A:

四個等級。

Q:
PCR出現(xiàn)基線漂移的可能原因有：
A:

蒸發(fā)、探針?biāo)?、相鄰熒光通道干擾等。

Q:
常用RNase抑制劑是
A:

DEPC（焦碳酸二乙酯）。

Q:
Sanger測序體系與PCR反應(yīng)體系的主要區(qū)別是
A:

前者含有：ddNTP

Q:
mRNA約占總RNA的
A:

5%

Q:
核酸檢測對標(biāo)本采集容器的要求是：
A:

密閉、一次性、無DNase和RNase、無菌。

Q:
肝素是TaqDNA聚合酶活性的
A:

強抑制劑。

Q:
PCR采用內(nèi)標(biāo)可識別擴增檢測的
A:

假陰性、假陽性。

Q:
Taqman熒光探針常用的熒光基團是：
A:

FAM,TET, VIC, HEX。

Q

新檢測系統(tǒng)（   ）情況下應(yīng)進行性能驗證。
A

常規(guī)應(yīng)用前、常規(guī)使用期間（定期）、更換試劑、儀器、校準(zhǔn)品溯源性改變、儀器搬遷、設(shè)施、環(huán)境嚴(yán)重失控等

Q

PCR室內(nèi)質(zhì)控品的濃度設(shè)置：
A

弱陽性質(zhì)控（濃度為檢測限2-4倍），陽性質(zhì)控，陰性質(zhì)控品。

Q

生物安全柜、超凈工作臺、通風(fēng)櫥三者的區(qū)別：
A

Q

陽性室內(nèi)質(zhì)控品出現(xiàn)假陰性失控的常見原因分析：
A

（1）核酸提取中的隨機誤差，如核酸提取中的丟失，有機溶劑的去除不徹底，標(biāo)本中擴增抑制物的殘留，所用耗材如離心管有PCR抑制物等。

（2）儀器的問題，如擴增儀孔間溫度的不一致性，孔內(nèi)溫度與所示溫度的不一致性等。     

（3）試劑的問題，如Taq酶和/或反轉(zhuǎn)錄酶的失活，探針的純度及標(biāo)記效率和核酸提取試劑的效率等。

Q

陽性室內(nèi)質(zhì)控品出現(xiàn)假陰性失控的常見原因分析：
A

（1）擴增產(chǎn)物的污染

（2）臨床標(biāo)本的核酸提取過程中發(fā)生的樣本間的交叉污染。

（3）噴槍等關(guān)鍵耗材污染

（4）試劑污染

（5）儀器故障

Q

出現(xiàn)實驗室污染怎么辦？
A

（1）開窗通風(fēng)

（2）用次氯酸鈉溶液清洗地面，實驗臺、墻面

（3）增加紫外燈照射時間

（4）用75%乙醇空中噴霧等方法去除

（5）每天進行上述過程，直到污染消除。

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