當(dāng)前比較常用的多肽合成方法是 Fmoc固相多肽合成方法，采用Fmoc基團(tuán)保護(hù)氨基酸的氨基，在哌啶條件下脫去Fmoc。

基于Boc保護(hù)的多肽合成方法，常見于液相多肽合成方法中，今天介紹一種Boc保護(hù)的固相多肽合成方法。

Boc固相法：經(jīng)典的Merifield固相法

在Boc固相法中，氨基保護(hù)采用三氯乙酰（TFA）可脫去Boc，側(cè)鏈保護(hù)基采用芐基醇類。常用的樹脂為氯甲基化聚苯乙烯樹脂或羥甲基化聚苯乙烯樹脂，以及更穩(wěn)定的對乙?；S酯（PMA）樹脂。Boc保護(hù)a-氨基的氨基酸衍生物共價(jià)交聯(lián)到樹脂上，用三氟乙酸（TFA）脫除Boc，三乙胺和游離的氨基末端，然后再偶聯(lián)下一個(gè)氨基酸。最終脫保護(hù)基多采用HF法。合成反應(yīng)完成后，去除保護(hù)基，將肽鏈與樹脂分離，即得目標(biāo)產(chǎn)物。

特點(diǎn)：不必純化中間產(chǎn)物，合成過程可以連續(xù)進(jìn)行

基本過程：將目標(biāo)多肽的C端羧基以共價(jià)鍵形式與一個(gè)不溶性高分子樹脂相連，然后以這個(gè)氨基酸的氨基作為起點(diǎn)，與另一個(gè)氨基酸作業(yè)（用DDC做耦合劑）形成肽鍵，不斷重復(fù)此過程，即可得產(chǎn)物。

溶劑：在固相合成中，絕大部分都采用二氯甲烷（DCM）作為溶劑，具有消旋率小和N-?；逍纬陕膬?yōu)點(diǎn)。

氨基、羧基、側(cè)鏈的保護(hù)及脫除：

要成功合成具有特定的氨基酸順序的多肽，需要對暫不參與形成酰胺鍵的氨基和羧基加以保護(hù)，同時(shí)對氨基酸側(cè)鏈上的活性基因也要保護(hù)，反應(yīng)完成后再將保護(hù)基因除去。同液相合成一樣，固相合成中多采用烷氧羰基類型作為α氨基的保護(hù)基，因?yàn)檫@樣不易發(fā)生消旋。保護(hù)基的選擇既要保證側(cè)鏈基團(tuán)不參與形成酰胺的反應(yīng)，又要保證在肽合成過程中不受破壞，同時(shí)又要保證在最后肽鏈裂解時(shí)能被除去。

例如：最早是用芐氧羰基，由于它需要較強(qiáng)的酸解條件才能脫除，所以后來改為叔丁氧羰基（BOC）保護(hù)，用TFA（三氟乙酸）脫保護(hù)，但不適用含有色氨酸等對酸不穩(wěn)定的肽類的合成。羧基通常用形成酯基的方法進(jìn)行保護(hù)。甲酯和乙酯是逐步合成中保護(hù)羧基的常用方法，可通過皂化除去或轉(zhuǎn)變?yōu)殡乱员阌糜谄瑪嘟M合；叔丁酯在酸性條件下除去；芐酯常用催化氫化除去。對于合成含有半胱氨酸、組氨酸、精氨酸等帶側(cè)鏈功能基的氨基酸的肽來說，為了避免由于側(cè)鏈功能團(tuán)所帶來的副反應(yīng)，一般也需要用適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)基將側(cè)鏈基團(tuán)暫時(shí)保護(hù)起來

成肽反應(yīng)

固相中的接肽反應(yīng)原理與液相中的基本一致，將兩個(gè)相應(yīng)的氨基被保護(hù)的及羧基被保護(hù)的氨基酸放在溶液內(nèi)并不形成肽鍵，要形成酰胺鍵，經(jīng)常用的手段是將羧基活化，變成混合酸酐、活潑酯、酰氯或用強(qiáng)的失去劑（如碳二亞氨）形成對稱酸酐等方法來形成酰胺鍵。其中選用DCC、HOBT或HOBT/DCC的對稱酸酐法、活化酯法接肽應(yīng)用最廣。

1、活化過程：

2、保護(hù)過程：

3、去除保護(hù)基過程：

十肽合成步驟

步驟一：

步驟二：

步驟三：（重復(fù)步驟一或步驟二），最終得到10肽。

缺點(diǎn)&優(yōu)點(diǎn)

缺點(diǎn)：固相合成的主要存在問題是固相載體上中間體雜肽無法分離，這樣造成最終產(chǎn)物的純度不如液相合成物，必需通過可靠的分離手段純化。

優(yōu)點(diǎn)：簡化并加速了多步驟的合成；因反應(yīng)在一簡單反應(yīng)器皿中便可進(jìn)行，可避免因手工操作和物料重復(fù)轉(zhuǎn)移而產(chǎn)生的損失；固相載體共價(jià)相聯(lián)的肽鏈處于適宜的物理狀態(tài)，可通過快速的抽濾、洗滌未完成中間的純化，避免了液相肽合成中冗長的重結(jié)晶或分柱步驟，可避免中間體分離純化時(shí)大量的損失；使用過量反應(yīng)物，迫使個(gè)別反應(yīng)完全，以便最終產(chǎn)物得到高產(chǎn)率；增加溶劑化，減少中間的產(chǎn)物聚焦；固相載體上肽鏈和輕度交聯(lián)的聚合鏈緊密相混，彼此產(chǎn)生一種相互的溶劑效應(yīng)，這對肽自聚集熱力學(xué)不利而對反應(yīng)適宜。

固相合成的研究發(fā)展前景

固相多肽合成已經(jīng)有40年的歷史了，然而到現(xiàn)在，人們還只能合成一些較短的肽鏈，更談不上隨心所欲地合成蛋白質(zhì)了，同時(shí)合成中的試劑毒性，昂貴費(fèi)用，副產(chǎn)物等一直都是令人頭痛的問題，而在生物體內(nèi)，核糖體上合成肽鏈的速度和產(chǎn)率都是驚人的，那么，是否能從生物體合成蛋白質(zhì)的原理上得到一些啟發(fā)，應(yīng)用在固相多肽合成（樹脂）上，這是一個(gè)令人感興趣的問題，也許是今后多肽合成的發(fā)展。