實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介：

油紅O脂肪染色法通常應(yīng)用于檢測(cè)組織或細(xì)胞內(nèi)的脂肪情況，油性紅O（Oil Red O）是一種脂溶性染料，是很強(qiáng)的脂溶劑和染脂劑，在脂肪內(nèi)能高度溶解，其染色原理是油紅O能特異性地與組織和細(xì)胞內(nèi)的中性甘油三脂、脂質(zhì)以及脂蛋白產(chǎn)生吸附作用從而使脂肪染色。染料在胞內(nèi)脂質(zhì)中的溶解度較溶液更大，當(dāng)燃料加入組織切片時(shí)，燃料從有機(jī)溶劑轉(zhuǎn)移而溶于組織內(nèi)的脂質(zhì)中，使組織內(nèi)的脂肪呈紅色。該染色方法用于分析細(xì)胞樣品中脂質(zhì)狀況。

實(shí)驗(yàn)操作方法：

（1）冰凍切片厚度 6～10μm，不固定或 10%福爾馬林固定 10min后水洗

（2）切片加入60%的異丙醇內(nèi)浸洗 2min

（3）用冰蒸餾水稍微清洗一遍（說明書沒說明要洗）

（4）切片加入改良油紅 O 染色液中，密閉染色 10～15min，該過程注意避光

（5）用冰蒸餾水清洗一遍（說明書沒說明要洗）

（6）加入 60%的異丙醇內(nèi)稍洗以去除染液（大約幾秒）

（7）加入冰蒸餾水中稍微清洗一遍

（8）Mayer 蘇木素染色液復(fù)染核 5min

（9）用冰蒸餾水清洗一遍

（10）片子用濾紙吸干水分

（11）用甘油明膠或阿拉伯糖膠封片。

注意事項(xiàng)：

1. 石蠟切片不能用于油紅O染色，原因在于石蠟包埋過程中需要脫水，脫水過程中需要乙醇-二甲苯和石蠟，二甲苯是有機(jī)溶劑，會(huì)把中性脂肪溶解；

2. 冰凍切片準(zhǔn)備時(shí)，包埋的降溫過程建議選擇干冰，原因在于若選擇液氮降溫過程較強(qiáng)烈，可能導(dǎo)致組織內(nèi)部炸裂，而干冰降溫的過程比較緩和，染出來的片子比較好看；

3. 切片的厚度要稍微厚一些，建議選擇8-10μm；

4. 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)建議設(shè)計(jì)陰性對(duì)照和陽性對(duì)照，如陽性對(duì)照可以用脂質(zhì)豐富的肝臟組織等，陰性對(duì)照可以根據(jù)文獻(xiàn)來選擇無脂肪沉積的組織。

文獻(xiàn)參考結(jié)果：