圖4. 抑制Ang2可破壞VETC的形成并減少肝癌的轉(zhuǎn)移。(A) Ang2在人VETC+ HCC組織中高表達(dá)。我們展示了人CD34和Ang2免疫組織化學(xué)染色的代表性圖像，以及VETC+ (n = 54)和VETC - (n = 86)組織中Ang2的相對水平。(B)敲低Ang2表達(dá)抑制Hepa1-6皮下移植瘤中VETC的形成(每組n = 5)。(C)敲低Ang2表達(dá)抑制Hepa1-6原位移植瘤VETC形成和轉(zhuǎn)移。將(B、C)穩(wěn)定沉默小鼠Ang2的Hepa1-6細(xì)胞株(sh-mAng2)和對照細(xì)胞株(sh-ctl)分別移植到C57小鼠皮下(B)和原位(C)。(C)以各組小鼠出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的數(shù)量占總荷瘤小鼠數(shù)量的比例為底部。匯總數(shù)據(jù)來自(B,C)的所有荷瘤小鼠。

圖6. 在非腫瘤組織和血流中檢測到內(nèi)皮包裹的癌栓。(A)鄰近的非腫瘤肝內(nèi)的癌栓完全被內(nèi)皮包裹。對1例VETC+ HCC患者的鄰近非腫瘤肝連續(xù)切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。該數(shù)字表示每個(gè)圖像的相對截面順序。(B) VETC+荷瘤小鼠非腫瘤組織中存在內(nèi)皮包裹的栓子。對Hepa1-6荷瘤小鼠的肝臟(不包括原發(fā)異種移植的肝葉)和肺組織進(jìn)行小鼠CD34免疫組織化學(xué)染色。(C、D)肝癌患者和荷瘤小鼠血流中均存在內(nèi)皮覆蓋的癌栓。從人VETC+ HCC患者(C)和Hepa1-6荷瘤小鼠(D)的血流中收集瘤栓。腫瘤細(xì)胞和血細(xì)胞分別用箭頭和箭頭表示。

圖7. VETC有助于整個(gè)腫瘤簇進(jìn)入血流。(A)由內(nèi)皮包裹的腫瘤團(tuán)突出并漂浮在腫瘤間質(zhì)血管腔內(nèi)。箭頭指向間質(zhì)中的血管。字母“a”、“b”和“c”表示腫瘤簇突入血管腔。(B) VETC與瘤周血管吻合為腫瘤簇進(jìn)入循環(huán)提供了通道。箭頭指示血管吻合部位:第2段VETC與瘤周血管被結(jié)締組織分隔，第3段開始吻合。字母“a”表示腫瘤簇被內(nèi)皮包裹，吻合后脫落到瘤周血管中。箭頭指向吻合血管內(nèi)漂浮的腫瘤團(tuán)。(C) VETC模式的癌栓被粉碎，并被輸送到鄰近的非腫瘤肝組織的不同血管中。箭頭指示腫瘤栓子分散到不同靜脈的部位。對(A-C)，連續(xù)切片的VETC+ HCC組織(A,B)或癌旁肝組織(C)進(jìn)行人CD34染色。該數(shù)字表示每個(gè)圖像的相對截面順序。比例尺= 100 μm。(D) emt依賴和vetc介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移級(jí)聯(lián)的示意圖模型。在經(jīng)典的轉(zhuǎn)移模型中(上圖)，癌細(xì)胞需要通過基質(zhì)和血管壁遷移和侵襲，以逃避失巢凋亡和免疫攻擊。EMT使癌細(xì)胞具有遷移和侵襲能力。在vetc介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移中(下圖)，整個(gè)腫瘤簇以不依賴emt的方式釋放到血流中。組織組織的保守和內(nèi)皮偽裝保護(hù)癌細(xì)胞免受失巢凋亡和免疫攻擊，并為癌細(xì)胞提供生存信號(hào)。此外，整個(gè)腫瘤簇很容易被困在血管中，導(dǎo)致轉(zhuǎn)移灶的形成。

《Dual and opposing roles of the androgen receptor in VETCdependent and invasion-dependent metastasis of hepatocellularcarcinoma.（JOURNAL OF HEPATOLOGY 2020）》

圖1.AR抑制VETC形成和肝內(nèi)轉(zhuǎn)移，但促進(jìn)肺轉(zhuǎn)移。(A- B)較低的AR水平與較高的HCC復(fù)發(fā)率和較差的總體生存率相關(guān)。采用免疫組化法將細(xì)胞核AR表達(dá)分為陽性- (AR+， 156例)和陰性(AR-， 85例)。Kaplan-Meier曲線顯示。采用log-rank檢驗(yàn)獲得P值。采用cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析hr及其95% ci。(C-E) AR的表達(dá)在伴有PVTT、內(nèi)皮包被微栓子或VETC的hcc中顯著降低。肝細(xì)胞癌(C)中無(-)或(+)PVTT (n = 200);無(未包被，76例)或有(包被，34例)內(nèi)皮包被的癌栓(D);(E)有VETC的肝癌(VETC+， n = 104)或有毛細(xì)血管的肝癌(VETC-， n = 137)。(F)在單純肝內(nèi)或肝外轉(zhuǎn)移的肝癌中，VETC+組(n = 47或15)或VETC-組(n = 61或11)的AR水平。(G)與Hepa-Ctrl腫瘤相比，Hepa-Ar異種移植瘤中VETC形成受到抑制。(H-I) hepa - ar來源的腫瘤顯示肝內(nèi)轉(zhuǎn)移減少，但肺轉(zhuǎn)移增加。

圖2.AR在體內(nèi)和VETC-肝癌細(xì)胞中抑制Angpt2的表達(dá)。(A)與Hepa-Ctrl腫瘤相比，Hepa-Ar來源的異種移植物中Angpt2水平降低。(B)人AR+ HCC組織(n = 156)的Angpt2水平低于AR- HCC組織(n = 85)。(C) AR和Angpt2在MHCC-97H和VETC-2細(xì)胞中的差異表達(dá)。(D-E)沉默AR可消除5a-DHT促進(jìn)AR核易位、降低細(xì)胞和分泌Angpt2水平的作用。  圖3.AR抑制VETC+肝癌細(xì)胞中Angpt2的表達(dá)。(A)穩(wěn)定AR表達(dá)細(xì)胞中AR定位的檢測。(B-C)異位表達(dá)AR可降低細(xì)胞和分泌Angpt2水平。

圖4. 恢復(fù)Angpt2表達(dá)可消除AR對VETC形成和肝內(nèi)轉(zhuǎn)移的抑制作用。(A-C)恢復(fù)Angpt2表達(dá)可消除AR對VETC形成的抑制作用。(D-E)恢復(fù)Angpt2表達(dá)可消除ar抑制的肝內(nèi)轉(zhuǎn)移，但不影響ar增強(qiáng)的肺轉(zhuǎn)移。

（圖5略）圖6. AR通過上調(diào)Rac1表達(dá)，促進(jìn)板足形成，從而促進(jìn)肝癌細(xì)胞的遷移/侵襲。(A) Ar過表達(dá)促進(jìn)Hepa1-6細(xì)胞的遷移和侵襲。(B)恢復(fù)Angpt2表達(dá)不影響AR在VETC-2細(xì)胞中的促遷移/侵襲作用。(C) VETC-肝癌細(xì)胞比VETC+肝癌細(xì)胞表現(xiàn)出更多的板足。(D)沉默AR抑制板足形成。(E-F)異位表達(dá)AR(r)增強(qiáng)板足形成和Rac1蛋白水平。(G) hepa - ar來源的原發(fā)腫瘤的Rac1水平高于Hepa-Ctrl來源的異種移植物。(H)一種Rac1抑制劑(NSC23766)可減弱Ar對Hepa1-6細(xì)胞的促遷移/侵襲作用。

圖7. ar增強(qiáng)的VETC+異種移植物肺轉(zhuǎn)移可通過抑制Rac1活性而消除。(A-B) Rac1抑制劑不影響VETC的形成。(C-D) Rac1抑制劑不影響ar抑制的肝內(nèi)轉(zhuǎn)移，但減弱ar促進(jìn)的肺轉(zhuǎn)移。每條上方表示發(fā)生轉(zhuǎn)移的小鼠數(shù)量相對于荷瘤小鼠總數(shù)。(E) Rac1抑制劑可延長Hepa-Ar荷瘤小鼠的存活時(shí)間。給出小鼠數(shù)量和中位總生存時(shí)間(n，天)。(F) Rac1抑制劑不影響異種移植物的血管面積和腫瘤生長。

圖8. Rac1過表達(dá)可減弱AR抑制劑對VETC-異種移植肝和肺轉(zhuǎn)移的抑制作用。(A) AR抑制劑(Enz)降低了lm9 - ctrl來源的腫瘤異種移植物中AR和Rac1的水平。(B) AR抑制劑抑制肝內(nèi)和肺轉(zhuǎn)移，恢復(fù)Rac1表達(dá)可消除這種作用。每條上方表示發(fā)生轉(zhuǎn)移的小鼠數(shù)量相對于荷瘤小鼠總數(shù)。(C) AR抑制和Rac1恢復(fù)均不影響血管形態(tài)和血管面積。

拓展：VETC為肝癌提供了一種不依賴于運(yùn)動(dòng)侵襲的新型高效轉(zhuǎn)移途徑, 這也可能是肝癌易于產(chǎn)生微血管/門脈癌栓, 導(dǎo)致早期血行轉(zhuǎn)移的重要原因。AR是調(diào)控肝癌轉(zhuǎn)移的“雙刃劍”，AR抑制劑也更適用于VETC^-HCC患者。此外，圍繞VETC相關(guān)多中心臨床研究及基于影像學(xué)等手段的研究報(bào)道也陸續(xù)發(fā)表。

參考文獻(xiàn)

[1]Fang JH, Zhang ZJ, Shang LR, Luo YW, Lin YF, Yuan Y, Zhuang SM. Hepatoma cell-secreted exosomal microRNA-103 increases vascular permeability and promotes metastasis by targeting junction proteins. Hepatology. 2018 Oct;68(4):1459-1475. doi: 10.1002/hep.29920. Epub 2018 Jul 25. PMID: 29637568.（Q1 IF17.298）

[2]Fang JH, Zhou HC, Zhang C, Shang LR, Zhang L, Xu J, Zheng L, Yuan Y, Guo RP, Jia WH, Yun JP, Chen MS, Zhang Y, Zhuang SM. A novel vascular pattern promotes metastasis of hepatocellular carcinoma in an epithelial-mesenchymal transition-independent manner. Hepatology. 2015 Aug;62(2):452-65. doi: 10.1002/hep.27760. Epub 2015 Apr 22. PMID: 25711742.（Q1 IF17.298）

[3]Fang JH, Xu L, Shang LR, Pan CZ, Ding J, Tang YQ, Liu H, Liu CX, Zheng JL, Zhang YJ, Zhou ZG, Xu J, Zheng L, Chen MS, Zhuang SM. Vessels That Encapsulate Tumor Clusters (VETC) Pattern Is a Predictor of Sorafenib Benefit in Patients with Hepatocellular Carcinoma. Hepatology. 2019 Sep;70(3):824-839. doi: 10.1002/hep.30366. Epub 2019 Mar 15. PMID: 30506570.（Q1 IF17.298）

[4]Renne SL, Woo HY, Allegra S, Rudini N, Yano H, Donadon M, Viganò L, Akiba J, Lee HS, Rhee H, Park YN, Roncalli M, Di Tommaso L. Vessels Encapsulating Tumor Clusters (VETC) Is a Powerful Predictor of Aggressive Hepatocellular Carcinoma. Hepatology. 2020 Jan;71(1):183-195. doi: 10.1002/hep.30814. Epub 2019 Aug 9. PMID: 31206715.（Q1 IF17.298）

[5]Zhou HC, Liu CX, Pan WD, Shang LR, Zheng JL, Huang BY, Chen JY, Zheng L, Fang JH, Zhuang SM. Dual and opposing roles of the androgen receptor in VETC-dependent and invasion-dependent metastasis of hepatocellular carcinoma. J Hepatol. 2021 Oct;75(4):900-911. doi: 10.1016/j.jhep.2021.04.053. Epub 2021 May 15. PMID: 34004215.（Q1 IF30.083）

[6]Wu MZ, Yuan YC, Huang BY, Chen JX, Li BK, Fang JH, Zhuang SM. Identification of a TGF-β/SMAD/lnc-UTGF positive feedback loop and its role in hepatoma metastasis. Signal Transduct Target Ther. 2021 Nov 17;6(1):395. doi: 10.1038/s41392-021-00781-3. Erratum in: Signal Transduct Target Ther. 2021 Dec 27;6(1):441. PMID: 34785655; PMCID: PMC8595887.（Q1 IF38.104）

[7]Xie C, Wang FY, Sang Y, Chen B, Huang JH, He FJ, Li H, Zhu Y, Liu X, Zhuang SM, Fang JH. Mitochondrial Micropeptide STMP1 Enhances Mitochondrial Fission to Promote Tumor Metastasis. Cancer Res. 2022 Jul 5;82(13):2431-2443. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-21-3910. PMID: 35544764.（Q1 IF13.312）

[8] Xiao MH, Lin YF, Xie PP, Chen HX, Deng JW, Zhang W, Zhao N, Xie C, Meng Y, Liu X, Zhuang SM, Zhu Y,Fang JH. Downregulation of a mitochondrial micropeptide, MPM, promotes hepatoma metastasis by enhancing mitochondrial complex I activity. Mol Ther. 2022 Feb 2;30(2):714-725. doi: 10.1016/j.ymthe.2021.08.032. Epub 2021 Sep 1. PMID: 34478872; PMCID: PMC8821931.（Q1 IF12.910）

[9]Fang JH, Chen JY, Zheng JL, Zeng HX, Chen JG, Wu CH, Cai JL, Wang ZY, Zhuang SM. Fructose Metabolism in Tumor Endothelial Cells Promotes Angiogenesis by Activating AMPK Signaling and Mitochondrial Respiration. Cancer Res. 2023 Apr 14;83(8):1249-1263. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-22-1844. PMID: 36715635.（Q1 IF13.312）

[10]Fu Q, Zhang Q, Lou Y, Yang J, Nie G, Chen Q, Chen Y, Zhang J, Wang J, Wei T, Qin H, Dang X, Bai X, Liang T. Primary tumor-derived exosomes facilitate metastasis by regulating adhesion of circulating tumor cells via SMAD3 in liver cancer. Oncogene. 2018 Nov;37(47):6105-6118. doi: 10.1038/s41388-018-0391-0. Epub 2018 Jul 10. Erratum in: Oncogene. 2019 Jul;38(28):5740-5741. PMID: 29991801; PMCID: PMC6250679.（Q1 IF8.756）

[11]Kurebayashi Y, Matsuda K, Ueno A, Tsujikawa H, Yamazaki K, Masugi Y, Kwa WT, Effendi K, Hasegawa Y, Yagi H, Abe Y, Kitago M, Ojima H, Sakamoto M. Immunovascular classification of HCC reflects reciprocal interaction between immune and angiogenic tumor microenvironments. Hepatology. 2022 May;75(5):1139-1153. doi: 10.1002/hep.32201. Epub 2021 Dec 12. PMID: 34657298.（Q1 IF17.298）

[12]Matsuda K, Kurebayashi Y, Masugi Y, Yamazaki K, Ueno A, Tsujikawa H, Ojima H, Kitago M, Itano O, Shinoda M, Abe Y, Sakamoto M. Immunovascular microenvironment in relation to prognostic heterogeneity of WNT/β-catenin-activated hepatocellular carcinoma. Hepatol Res. 2023 Apr;53(4):344-356. doi: 10.1111/hepr.13869. Epub 2023 Jan 11. PMID: 36517953.（Q2 IF4.2）

[13]Lin WP, Xing KL, Fu JC, Ling YH, Li SH, Yu WS, Zhang YF, Zhong C, Wang JH, Chen ZY, Lu LH, Wei W, Guo RP. Development and Validation of a Model Including Distinct Vascular Patterns to Estimate Survival in Hepatocellular Carcinoma. JAMA Netw Open. 2021 Sep 1;4(9):e2125055. doi: 10.1001/jamanetworkopen.2021.25055. PMID: 34515782; PMCID: PMC8438596.（Q1 IF13.8）