 1試劑準(zhǔn)入與驗(yàn)收  1.1試劑準(zhǔn)入 嚴(yán)格按照國家藥品監(jiān)督管理局(NMPA)《體外診斷試劑分類規(guī)則》和《關(guān)于過敏原類、流式細(xì)胞儀配套用、免疫組化和原位雜交類體外診斷試劑產(chǎn)品屬性及類別調(diào)整通告(2017年第226號）》的要求，做好試劑分類管理。建立文件化管理程序，包括試劑準(zhǔn)入、采購、驗(yàn)收、性能驗(yàn)證、持續(xù)性能跟蹤記錄和供應(yīng)商評價(jià)等。準(zhǔn)入時(shí)，對NMPA分類的一類試劑需有備案證，三類免疫組化和分子檢測試劑必須持有3類注冊證。相同品名但分類不同的試劑（一類和三類）不能通用和互相替代。嚴(yán)禁使用來歷不明的試劑。受監(jiān)管的劇毒危險(xiǎn)化學(xué)品，應(yīng)在申購前向所在地相關(guān)主管部門備案。在審核供應(yīng)商資質(zhì)時(shí)，“三證一照”要齊全。 1.2抗體試劑與克隆號 抗體試劑命名大部分來自基因?qū)W的名稱，但是其具體特征卻以某一段氨基酸序列（即克隆號）來決定。克隆號不同，用途也有不同。例如PD-L1的22C3和SP263克隆號所對應(yīng)的指導(dǎo)用藥不一樣。免疫組化抗體試劑的唯一性標(biāo)識是克隆號。選擇抗體應(yīng)遵循克隆號唯一性原則。不同克隆號的抗體特異性存在一定的差異，首選行業(yè)指南共識推薦和NMPA認(rèn)證批準(zhǔn)的試劑（表1)。但是，大部分供貨商在試劑標(biāo)簽上并沒有標(biāo)識克隆號，很多實(shí)驗(yàn)室人員對克隆號亦不了解。因此，臨床實(shí)踐中常有克隆號和抗體名稱混雜的現(xiàn)象。工作中可以根據(jù)病理診斷醫(yī)師的需求，有明確指南共識提及的克隆號必須選用。如行業(yè)指南指定克隆號MIB-1的Ki67運(yùn)用于神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的分級診斷，4B5的HER2檢查用于赫賽汀的用藥指導(dǎo)，SP44的MET用于非小細(xì)胞肺癌檢測等。對于暫時(shí)沒有指南共識的情況，擇優(yōu)選擇文獻(xiàn)中高引用率或者行業(yè)室間質(zhì)評中高通過率的試劑克隆號作為選擇的參考。
1.3試劑驗(yàn)收 應(yīng)確保試劑的描述信息和招標(biāo)協(xié)議完全一致。驗(yàn)收時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對新批號或同一批號不同貨運(yùn)號的試劑進(jìn)行驗(yàn)收，驗(yàn)貨時(shí)應(yīng)有交接人簽名，合格后存儲。病理實(shí)驗(yàn)室試劑驗(yàn)收注意事項(xiàng)包括：(1)驗(yàn)收時(shí)檢查有無注冊證或備案證，需與采購協(xié)議一致。(2)驗(yàn)收時(shí)觀察外包裝是否完整，封口是否完好，有效期、批號與品名核對是否有誤。試劑瓶標(biāo)簽的有效期和批次信息完整，外觀完好，試劑的性狀未發(fā)生改變。(3)運(yùn)輸冷鏈條件達(dá)標(biāo)，驗(yàn)收時(shí)溫度適宜。(4)低溫保存的試劑驗(yàn)收后應(yīng)立即放置合適的冰箱儲存。(5)對于易燃易爆物品的驗(yàn)收，應(yīng)遠(yuǎn)離火源等潛在危險(xiǎn)因素。  2出入庫管理  2.1出入庫記錄 2.2存儲與冷鏈 病理科試劑是否需要冷鏈，根據(jù)試劑說明書要求確定。試劑存儲按序分類，統(tǒng)一設(shè)立庫房（二級庫）管理，按區(qū)域可設(shè)置有貨架、試劑柜、冰箱、冷藏柜和通風(fēng)設(shè)施等，必要時(shí)采用冷鏈數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)來監(jiān)控環(huán)境以及試劑溫度。檢查免疫組化和分子檢測試劑的“領(lǐng)、存、用”過程中冷鏈溫度是否達(dá)標(biāo)。按照國食藥監(jiān)械229號《關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑注冊管理辦法》，大部分IVD體外診斷試劑均要求2~8℃存儲。未開封試劑和啟用試劑不能混放。 2.3危險(xiǎn)化學(xué)品試劑
 3性能驗(yàn)證  3.1病理科常規(guī)試劑驗(yàn)證 3.2病理科免疫組化試劑驗(yàn)證 3.3病理科分子試劑驗(yàn)證 3.3.1基于PCR擴(kuò)增的定性檢測試劑驗(yàn)證 驗(yàn)證商品化試劑盒性能指標(biāo)與說明書中描述的該試劑性能指標(biāo)是否一致，對于定性檢測［如EGFR/KRAS/NRAS/BRAF等擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)PCR(ARMS)檢測或二代測序］一般包括準(zhǔn)確度、特異性、檢出下限、抗干擾能力等性能指標(biāo)。參考中國合格評定國家認(rèn)可委員會《CNAS-CL039分子診斷檢驗(yàn)程序性能驗(yàn)證指南》，特異性是指檢測方法對真陰性樣本檢測出陰性結(jié)果的能力，準(zhǔn)確度是指檢測方法對真陽性樣本和真陰性樣本檢測出正確結(jié)果的能力，一般通過與金標(biāo)準(zhǔn)或其他可比較方法進(jìn)行比較，計(jì)算得出。按照經(jīng)典四格法，特異性=D/(B D)×100%,準(zhǔn)確度=(A D)/(A B C D)×100%。檢出下限是指檢測方法可檢測出的最低被測樣品的濃度，也稱為檢測低限或最小檢出濃度，其反映了檢驗(yàn)方法的分析靈敏度。對于檢測下限位點(diǎn)的選擇不必覆蓋試劑盒涉及的所有位點(diǎn)，重點(diǎn)選擇具有明確或重要臨床意義的位點(diǎn)。抗干擾能力指通過混入干擾物質(zhì)評估檢測方法受干擾物質(zhì)的影響。常見的干擾物包括內(nèi)源性干擾物（血紅蛋白、黑色素、甘油三酯、膽紅素等）和外源性干擾物（乙醇、石蠟、蛋白酶K等）。 3.3.2熒光原位雜交試劑驗(yàn)證 3.3.3核酸提取試劑驗(yàn)證 對該試劑盒提取效率進(jìn)行驗(yàn)證，驗(yàn)證內(nèi)容包括核酸純度、核酸提取產(chǎn)率和核酸完整性。按照試劑盒要求，提取含有不同濃度核酸的樣本，其濃度應(yīng)覆蓋試劑盒說明書中描述的可提取的核酸濃度。(1)核酸純度：紫外分光光度計(jì)或微量分光光度計(jì)測定提取好的核酸OD260/OD280比值，DNA樣本OD260/OD280比值是1.7~1.9,RNA樣本OD260/OD280比值：1.8~2.0。(2)核酸提取產(chǎn)率應(yīng)不低于試劑盒說明書或?qū)嶒?yàn)室規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。將樣本平均分成2份，其中一份(A)加入一定體積（小于總體積10%)已知濃度的待測核酸，另一份(B)加入同體積的BUFFER,按照試劑盒操作步驟提取核酸后，紫外分光光度計(jì)分別測定A和B提取物，按(A-B)/加入的已知核酸量公式計(jì)算核酸提取產(chǎn)率，重復(fù)3次，計(jì)算平均值。(3)核酸完整性：按照試劑盒要求，提取含有不同濃度核酸的樣本，其濃度應(yīng)覆蓋試劑盒說明書中描述的可提取的核酸濃度，取一定量的核酸進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳或生物分析儀分析，或擴(kuò)增不同片段長度的管家基因后毛細(xì)管電泳，分析核酸完整性。  4試劑有效期   5試劑廢棄物 根據(jù)中華人民共和國國務(wù)院令第591號《危險(xiǎn)化學(xué)品安全管理?xiàng)l例》文件以及應(yīng)急管理部(2022)22號《“十四五”危險(xiǎn)化學(xué)品安全生產(chǎn)規(guī)劃方案》文件要求，化學(xué)試劑的廢棄物按其是否有害進(jìn)行分類。病理科普通無毒無害的試劑剩余物或反應(yīng)物以及乙醇與水稀釋后達(dá)不到易燃條件，DAB稀釋至國家排放標(biāo)準(zhǔn)(5mg/L)可以直接排入連接醫(yī)院污水處理系統(tǒng)的排水管道內(nèi)。病理危險(xiǎn)化學(xué)品的廢棄處理，必須做好銷毀登記，留有記錄。污染性廢液如甲醛、二甲苯等需要進(jìn)行專門收集，并且由有資質(zhì)的廢液處理公司進(jìn)行處理；高濃度的DAB,可以放入用燃燒方法處理的廢液（如丙酮、二甲苯）或醫(yī)療廢物內(nèi)。廢液的排放量和處理流程應(yīng)留有記錄。制定化學(xué)試劑應(yīng)急處理預(yù)案，使科室內(nèi)每一位成員對可能出現(xiàn)的意外及處置方案做到心中有數(shù)，處理措施及時(shí)得當(dāng)。 綜上所述，病理科試劑管理不僅涉及上述流程與規(guī)范，更貫穿于實(shí)驗(yàn)室“人機(jī)料法環(huán)”的全過程。為確保檢測結(jié)果的穩(wěn)定與卓越，推薦使用原裝試劑或試劑盒，并搭配相應(yīng)的檢測平臺及指定程序，以此減少變量，提升實(shí)驗(yàn)效果。例如，商業(yè)化試劑盒如伴隨診斷PD-L1(22C3)在不同檢測體系或設(shè)備平臺下，其試劑性能表現(xiàn)也各有差異。因此，普遍觀點(diǎn)認(rèn)為，采用專機(jī)專用試劑更有利于通過室間質(zhì)評，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。行業(yè)積極就病理實(shí)驗(yàn)室各類試劑的使用形成共識，以推動質(zhì)量提升和持續(xù)改進(jìn)，為病理診斷提供更為精準(zhǔn)可靠的依據(jù)。 共識編寫專家組成員（按單位名稱漢語拼音字母順序排序）：安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院（潘美華）；北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部／北京大學(xué)第三醫(yī)院（張燕）；重慶市人民醫(yī)院（劉瑾）；北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院（周立新）；福建省立醫(yī)院（陳昕）；福建省腫瘤醫(yī)院（師怡、吳在增）；福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院（李國平）；復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院（張靜、周學(xué)科）；復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院（宿杰阿克蘇、黃潔）；復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院（高名士）；廣東省人民醫(yī)院（駱新蘭）；廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院（黨裔武）；廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院（崔錦珠）；哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院（孟宏學(xué)）；軍醫(yī)大學(xué)海軍附屬長海醫(yī)院（倪燦榮）；航天中心醫(yī)院（侯芳）；河南省人民醫(yī)院（孫廷誼）；湖北省腫瘤醫(yī)院（王明偉）；華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院（羅丹菊、翁密霞）；吉林大學(xué)第一醫(yī)院（王渝）；江南大學(xué)附屬中心醫(yī)院（湯鴻）；江蘇省人民醫(yī)院（張煒明）；西（胡沛臻、錢守斌）；遼寧省腫瘤醫(yī)院（何蓮）；軍醫(yī)大學(xué)陸軍大坪醫(yī)院（毛成毅）；南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院（吳鴻雁、楊軍）；寧波病理診斷中心（陳潔、俞吉霞）；寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院（秦璟、李國富）；青島大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院（趙潔）；山西省腫瘤醫(yī)院（肖彥增）；陜西省寶雞市中心醫(yī)院（徐燕）；陜西省腫瘤醫(yī)院（王曉敏）；上海交通大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院（許海敏）；上海交通大學(xué)附屬新華醫(yī)院（虞文偉）；上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽醫(yī)院（冼志紅）；首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院（高穎）；四川大學(xué)華西醫(yī)院（雷松、陳敏）；蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院（朱衛(wèi)東）；天津中心婦產(chǎn)科醫(yī)院（宋劍嬋）；溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院（黃卡特）；西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院（靳耀鋒）；新疆石河子大學(xué)第一附屬醫(yī)院（鄭玉琴）；新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院（苗娜、師藝）；云南省腫瘤醫(yī)院（陳蕓）；云南省第三人民醫(yī)院（徐開軍）；浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院（丁偉、姚洪田、鄒尹影、徐黎明）；浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院（王海軍）；浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬杭州市第一人民醫(yī)院（王煒）；浙江省腫瘤醫(yī)院（胡錦林、張谷）；鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院（高冬玲、黃培）；中國人民解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心（宋欣）；中國人民解放軍北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院（秦海明）；中國人民解放軍東部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院（馬恒輝、王璇）；中國人民解放軍總醫(yī)院第四醫(yī)學(xué)中心（康佳蕊）；中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院（王德田、薛曉偉、周良銳、龐鈞譯）；中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院（郭蕾、鄭波、趙琳琳）；中南大學(xué)湘雅醫(yī)院（傅春燕、徐志杰）；中日友好醫(yī)院（張紅雷）；中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院（梁英杰、董愉）；中山大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院（肖永波、盧佳斌）。 作者信息
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